狗狗pcr为什么要测几次?

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PCR原理上,扩增出DNA序列是很肯定的,但能否扩增到感染病毒细胞的DNA而不扩增宿主细胞DNA是另一个问题。 狗体内可能含有较多与犬瘟病毒类似的病毒片段(伪狂犬、轮状病毒等),这些病毒片段的基因组具有较高的同源性,而PCR是一种“随机”扩增过程,很可能扩增出来的是犬瘟病毒的基因片段与其他病毒相似基因的片段的混合物;或者由于某些未知原因(比如引物设计不合适或反应条件不合适等)使PCR产物无法纯化而使得结果不可靠甚至无法得到PCR产物。因此需要多次重复实验来确保结果的可靠性。 如果PCR重复三次仍不能检测到犬瘟病毒的DNA,则只能说明该病犬从未感染过犬瘟病毒——因为如果检测不到的话就只能说明PCR过程中没有扩增出任何DNA。

对于PCR反应而言,理论上只要PCR反应条件合适而且样品中待扩增DNA数量足够多即可完全扩增出来。但是现实中存在一些影响因素,例如样品中的DNA在提取的过程中被破坏得严重以致于无法扩增;引物的设计不正确导致目的基因无法扩增等等都会造成无法检测到目的基因的情况。 如果PCR检测结果为阳性且阳性结果经过多次验证正确无误即能确定待检样本感染了犬瘟病毒;反之若检测结果为阴性则表示待检样本不含有犬瘟病毒。

蓬卓月蓬卓月优质答主

测3次吧(虽然结果都一样) 第一次加引物,第二次加荧光染料标记的探针,第三次加引物、探针和荧光染料标记物。 如果有病毒的话,应该都有荧光信号且强弱一样;如果检测为阴性,就没有荧光信号了。 根据这个原理,可以判断是不是阳性,并且对阳性进行确认。

在测之前最好也测一下,确保没有病毒进入体内。 用荧光定量PCR测试时,由于引入了实时监测系统,可以通过软件自动控制温度循环,这样能够保证整个实验流程的精确度(特别是扩增曲线中,峰的形态能非常清楚地表现出来),进而保证了结果的准确性。

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